貨號 PH0316

名稱 RIPA裂解液(強) | RIPA Lysis Buffer (Strong)

存儲 常溫運輸，2～8℃保存，有效期12個月

注意：如發現RIPA有沉淀，請放室溫半小時或者常溫水浴使沉淀溶解。

根據使用量，取每1ml RIPA 加入10ul PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM，混勻備用 （PMSF現用現加）。

產品描述 

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統的細胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的Western、IP和ELISA等。

RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多種，根據其裂解液的強度大致可以分為強、中、弱三類。

RIPA裂解液(強)的主要成分為50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA等多種抑制劑。可以有效抑制蛋白降解。

用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用PHYGENE的BCA蛋白濃度測定試劑盒(PH0326)測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

使用說明 

(一) 貼壁培養細胞：

1、 取 Enhanced RIPA Lysis Buffer 室溫溶解混勻， 加入 PMSF，使 PMSF 終濃度為 1mM。

2、 去除貼壁細胞的培養液，用 PBS、 NS 或無血清培養液清洗 1 次，低速離心，棄上清，留取沉淀。

3、 按照6孔板每孔加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例， 加入RIPA Lysis Buffer 。移液器輕輕吹打，使裂解液和細胞充分接觸。置于冰上或 4℃裂解 15～30min，通常裂解液作用于細胞 1～3 秒內，細胞就會被裂解。通常 6 孔板每孔細胞加入 150μl 裂解液已經足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到 200～250μl。

4、 充分裂解后，10000～12000g，4℃離心 5～10min(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清，即可進行后續的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

5、 進行后續的 SDS-PAGE、 Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(二)懸浮培養細胞

1、 取 Enhanced RIPA Lysis Buffer 室溫溶解混勻，加入 PMSF，使 PMSF 終濃度為 1mM。

2、 低速離心懸浮細胞，棄上清，收集沉淀。

3、 用手指輕彈細胞，使其松散。按照 6 孔板每孔細胞加入 150～250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例，加入 Enhanced RIPA Lysis Buffer。通常 6 孔板每孔細胞加入 150μl 裂解液已經足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到 200～250μl。再用手指輕彈以充分裂解細胞，充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。

4、 10000～12000g，4℃離心 5～10min(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清。

5、 進行后續的 SDS-PAGE、 Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

（三）組織樣品：

1、 取 Enhanced Lysis Buffer 置于室溫溶解混勻 ， 加入 PMSF，使 PMSF 終濃度為 1mM。

2、 把組織剪切成細小的碎片，越小越好。 取在液氮或超低溫冰箱中冷凍 30min 以上的組織，迅速用液氮研磨，研磨過程盡量控制在 1～2min 之內，以減少蛋白的降解。

3、 按照每20mg組織加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解 15-30min。

4、 步驟 3、 4 亦可以采用如下過程：按照每 20mg 組織加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的 Enhanced RIPA Lysis Buffer。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿，直至充分裂解，該過程盡量控制在 1～2min 之內，以減少蛋白的降解。

5、 10000～12000g，4℃離心 5～10min(如無低溫離心機，室溫下離心亦可)，取上清。

6、 進行后續的 PAGE、 Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

注意事項 

1、 去除貼壁細胞的培養液后，如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不用清洗。

2、 如果裂解不充分可以適當增加裂解液的用量，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。

3、 如果細胞量較多，必需分裝成 50～100 萬細胞/離心管，然后再裂解。大團的細胞較難裂解充分，而少量的細胞由于裂解液容易和細胞充分接觸，相對比較容易裂解充分。

4、 如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈 Vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續實驗。

5、 溶解 RIPA Lysis Buffer 時，應盡量縮短溶解時間，避免有效成分失效。

6、 裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物，屬正常現象。該透明膠狀物為含有基因組DNA 等的復合物。在不檢測和基因組 DNA 結合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續實驗；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子，例如 NF-KB、 p53 等時，通常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉錄因子。

7、 細胞裂解的操作步驟，應置于冰上或 4℃進行。

8、用戶使用前需可根據需要再加入leupeptin，aprotinin等其它抑制劑。

Radioimmunoprecipitation assay buffer (RIPA buffer) is a lysis buffer used to lyse cells and tissue for the radio immunoprecipitation assay (RIPA). This buffer is more denaturing than NP-40 or Triton X-100 because it contains the ionic detergents SDS and sodium deoxycholate as active constituents and is particularly useful for disruption of nuclear membranes in the preparation of nuclear extracts. The RIPA buffer gives low background but can denature kinases.